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標準品的制備、鑒定、計量
更新時間:2012-08-14 點擊量:1759

標準品的制備、鑒定、計量

1.標準品的制備:標準品的制備是非常復雜的問題,也是標記免疫分析中比較難于制備的一個成分。以下討論的是實驗室標準品或商品化試劑中標準品的制備。

   1)基質(zhì)的制備:如前所述,作為標準品的介質(zhì)基質(zhì)成分應(yīng)與被測樣品相同。對大多數(shù)用于測定血清中某物質(zhì)的標準品,應(yīng)用不含被測物質(zhì)的零血清制備,以求反應(yīng)的介質(zhì)環(huán)境相當。但有時零值血清的制備十分困難,所以有些標準品用適當?shù)木彌_液制備,并在緩沖液中加入一定量的載體蛋白一般用1%2%的牛血清白蛋白,以便使其與樣品的介質(zhì)環(huán)境相近。 

   零值血清的制備方法有: 

   (1)吸附法:血清中小分子物質(zhì)如三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)等,可用活性炭吸附去除。這種方法簡便,但待測物質(zhì)難以清除干凈,而且大分子活性物質(zhì)不能用此法進行制備。 

   (2)反復凍融法:對大分子活性物質(zhì)可選用低值血清,經(jīng)反復凍融使被測物質(zhì)失活。用這種方法可使某些蛋白類激素大部分失活,但也難以得到真正的零值血清。 

   (3)親和層析法:用特異性抗體制備親和層析柱,用以吸附被測抗原。用這種方法可以得到高質(zhì)量的零值血清,但本法比較復雜而且成本也高。 

    2)標準物純品的選擇:應(yīng)選擇高化學純和高免疫純的純品作標準品。其中免疫純尤為重要,在標準品中不應(yīng)含有與被測物質(zhì)有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。

    3)標準品的制備:先用零值血清配置高濃度的標準品,然后根據(jù)實驗系統(tǒng)的要求,用零值血清將高值血清稀釋至應(yīng)有的濃度,制成符合預定要求的,由不同濃度組成的系列標準品。2.標準品的鑒定 

1免疫活性的鑒定:選用高特異性的抗血清分別作*標準品WHO的參考品或國家標準品的待鑒定標準品的劑量反應(yīng)曲線,并觀察兩條曲線的平行性。如兩條劑量反應(yīng)曲線平行,說明兩種物質(zhì)對同一抗體有相同的親和力,即二者是同質(zhì)性物質(zhì)。如兩條劑量反應(yīng)曲線不平行,說明兩種物質(zhì)具有異質(zhì)性,因而這一待鑒定的標準品是不能使用的。 

2濃度的標定:用已鑒定過的,免疫活性合格的標準品,與*的標準品作濃度相同的劑量反應(yīng)曲線。此時,兩條劑量反應(yīng)曲線應(yīng)該是基本重合的。如果兩者平行但不重合,則取兩條劑量反應(yīng)曲線的50%結(jié)合處的相應(yīng)劑量( ED50 )計算二者的換算系數(shù),然后調(diào)整待鑒定標準品的濃度,直至使兩條劑量反應(yīng)曲線*或基本重合為止。 

3.標準品的計量:許多小分子抗原或半抗原已能得到純品或進行合成,它們對作為標準品的要求可以得到基本的滿足,其計量多直接用單位體積中的重量表示,如mg / ml、ng / ml pg / ml等。zui近WHO推薦用質(zhì)量單位取代重量單位,即mol / L、mmol / L、或nmol / L等。對大分子的活性物質(zhì)則比較復雜。由于得不到的純品,故很難直接用單位體積中的重量或單位體積中的質(zhì)量計量。因此,常用該物質(zhì)的生物活性單位表示,如IU / L、mIU / L等。

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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